《猪病学》第十版中表述“非洲猪瘟病毒能在5℃(41℉)的血清中存活6年,在pH13.4(强碱)含25%的血清培养基中能存活一周”,为验证有机物对囊膜病毒的消毒效果的是否有干扰,特设计了如下实验:
一、细胞模型试验
(1)细胞模型的试验方法
病毒先与干扰物混合(让干扰物包裹病毒)→以适当浓度稀释的消毒剂与病毒液感作30min→按测定毒价的方法倍比稀释,接种细胞→观察细胞病变,与阳性对照比较毒价的差异→通过PCR确认结果。
干扰物选择:
植物油(终浓度占比20%);牛奶(终浓度占比20%)。
(2)试验结果
试验结果显示,牛奶对5%戊二醛+5%癸甲溴铵(1:500)和10%戊二醛+10%苯扎溴铵(1:1000)的杀灭伪狂犬病毒的能力有严重的干扰,导致绝大多数的伪狂犬病毒没有被灭活;油脂对复方戊二醛有一定的干扰,部分病毒没有被灭活,但比受到牛奶等蛋白质的影响小。
牛奶对过硫酸氢钾复合物粉(1:800)的消毒效果有一定的影响,但过硫酸氢钾复合物粉不受植物油的干扰,表明过硫酸氢钾复合物粉的使用效果会受到一定条件的制约。
有机酸(PH3.58)在牛奶和植物油存在下对伪狂犬病毒的杀灭能力都没有影响,说明在有机物存在下有机酸的消毒效果不受影响,使用可靠性最佳。
二、小鼠模型试验
(1) 试验方法
100LD50的病毒先与干扰物混合(让干扰物包裹病毒)→以适当浓度稀释的消毒剂与病毒液感作30min→接种小鼠→饲养七天后观察死亡率→通过PCR确认结果
干扰物选择:植物油(终浓度占比20%);牛奶(终浓度占比20%);血清(终浓度占比20%)
(2) 试验结果
结果显示,复合有机酸不受牛奶、血清和油脂的干扰,可以完全杀灭病毒,小鼠均没有死亡。
复方戊二醛受牛奶和血清干扰很大,大部分小鼠接种后死亡,表明未有效灭活病毒。油脂对复方戊二醛在小鼠上显示没有影响(在细胞模型上病毒的杀灭率可达99.99%以上,有可能是杀灭后的病毒没有达到小鼠的最小致死剂量);过硫酸氢钾复合物粉也受到牛奶和血清的严重干扰,导致接种后小鼠死亡。
三、讨论
复合有机酸在实验中表现出的不受有机物干扰的特性,表明其有更广阔的应用潜力,特别是在未能进行充分清洗的环境中,应用有机酸进行消毒将更为可靠。
有机酸可更有效快速接触病原作用机理是溶液中有大量的有机酸是不完全解离的,这些酸具有羧基端,具有亲脂性,羟基与生物膜相似相溶,渗透能力强,突破病原体的生物膜后这些有机酸能释放H+并水解核酸或蛋白质,快速杀灭病原。
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